Jesus sentado no centro representa o centro do universo, caracterizando as qualidades de todos os doze signos.
Da direita para a esquerda: O apóstolo Simão (o Zelote) representa Áries; Judas Tadeu, Touro; Mateus, Gêmeos; Filipe, Caranguejo; Tiago (o Maior), Leão; Tomé, Virgem; João, Libra; Judas, Escorpião; Pedro, Sagitário; André, Capricórnio; Tiago (o Menor), Aquário e Bartolomeu, Peixes.
"Leonardo esquematizou a disposição dos apóstolos de acordo com a posição astronômica, da direita para a esquerda de quem vê o quadro.